多参数单细胞质谱流式细胞术分析检测中冷冻 [复制链接]

生物样本库BS小组

摘要：

背景：全面理解肿瘤进展调控过程中涉及到的免疫细胞亚群对肿瘤免疫治疗的发展极为重要。历史上已通过流式细胞技术（FC）完成了单细胞免疫表型分析，能够分析的标志物多达18个。近期质谱流式细胞术（MC）的进展，在利用高分辨质谱（MS）检测的基础上，可以进行超过50个标志物的检测。本研究使用商业CyTOF?设备，利用便于分析和操作的MC技术，用于肿瘤微环境免疫表型深度分析，并进一步讨论了肿瘤标本完整性管理所面临挑战。

结果：对冷冻外周血单个核细胞（PBMCs）的初步纵向研究显示了9个独立试验中最小MC批内变异。另外，采用MC和FC技术检测常见白细胞系标记物的结果证实这些方法在细胞亚群鉴定中具有可比性。对39个标志物的高级多参数质谱流式细胞术分析综合评估了新鲜和冷冻保存的肿瘤样本中细胞表面标志物的表达水平。该对比分析提示冷冻保存后多个标志物的表达水平显著减少。最显著的是，冷冻样本中未检测到骨髓来源的抑制细胞（MDSC），该细胞以CD66b+和CD15+共表达以及HLA-DRdim、CD14?表型定义。

结论：这些结果表明冷冻保存方案的优化与评估对于准确发现冷冻肿瘤标本的标志物非常必要。

关键词：质谱流式细胞术（MC）；CyTOF?；流式细胞术（FC）；肿瘤标本；肿瘤微环境（TME）；肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs）；免疫表型分析；冷冻保存；ViSNE；

编者按：本研究通过采用14个细胞表面标记物对良好表征的同一批次的PBMCs进行9次独立试验，首次评估了MC的稳定性。通过建立优化的MC产量、检测和数据分析方案，与传统FC的检测结果相比，进一步验证了PBMCs和临床肿瘤样本综合免疫表型分析的适用性。结果表明PBMCs和肿瘤标本MC检测结果与FC检测结果具有可比性。MC具有同时进行多达39个标志物的多重分析能力。CyTOF?平台可同时进行39个标志物的检测、分析，该能力证明CyTOF?平台可用于发现综合性的多参数生物标志物。可以想象进一步提高MC平台的灵敏度和通量后，MC将会成为临床活检时研究肿瘤和免疫亚型之间复杂关联的重要检测手段。这尤其对于开发旨在克服肿瘤逃逸的新型免疫调节治疗至关重要。另外，评估MC进行多参数分析高潜力准确性的同时，本研究还通过对比新鲜和冷冻保存过的人体肿瘤样本，进一步评估了冷冻保存对免疫细胞标记物的影响。由于本研究考虑到临床样本在运输中的稳定性以及为各个样本分析条件的标准化，样本只在采集后经过短时的普通冷冻保存，然后即作为单一批次进行分析，以求将技术和系统差异降到最低。然而最近发表的文章对这样处理样本提出了一致性和可靠性的质疑。本研究结果也建议冷冻保存的肿瘤样本用于发现生物标记物时要非常谨慎，而且需进一步的研究确定更先进的冷冻保存方案。

作者：ElmaKadi?,etal.

编译：罗雪粤

校审：王雅杰

原文：

Effectofcryopreservationondelineationofimmunecellsubpopulationsintumorspecimensasdeterminatedbymultiparametricsinglecellmasscytometryanalysis.BMCImmunologyFeb2;18(1):6.doi:10./s---1.